高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中做相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。HPLC廣泛應用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。 LC-310高效液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過(guò)檢測器時(shí)，吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號變化，從而產(chǎn)生色譜譜圖，最終的結果就要靠后期的色譜數據處理系統。
譜圖處理完即可制作校正曲線(xiàn)，校正曲線(xiàn)是數據處理的重點(diǎn)，是將標樣譜圖的信息與數據做成一個(gè)標準，供處理試樣譜圖使用。校正是通過(guò)分析指定的準備好的標準樣品，來(lái)確定計算絕對組分濃度的響應因子的過(guò)程。接下來(lái)介紹常用的數據處理方法：
1.外標法
外標法是指添加一定量的標準品于空白樣品中制成對照樣品，與未知檢測樣品平行進(jìn)行樣品處理并檢測，根據對照品響應值與標準品的濃度函數關(guān)系計算出未知檢測樣品中被測組分濃度的定量方法。
2.內標法
內標法指的是將一定重量的純物質(zhì)作為內標物加到一定量的被測樣品混合物中，然后對含有內標物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積及相對校正因子，按公式計算出被測組分的含量。
3.兩種數據處理方法的區別
內標法是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，外標法不是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定。
1、外標法要求儀器重復性很?chē)栏?，適于大量的分析樣品，因為儀器隨著(zhù)使用會(huì )有所變化，因此需要定期進(jìn)行曲線(xiàn)校正。此法的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，計算方便，不需測量校正因子，適于自動(dòng)分析。但儀器的重現性和操作條件的穩定性必須保證，否則，會(huì )影響實(shí)驗結果。
2、內標法要求挺嚴格的，對于內標物的選擇要有一定的原則，適于分析樣品量較少的情況；不要求樣品里的所有組分都出峰，只要內標物和所關(guān)注的組分出峰并分離好就可以了；定量準確，對進(jìn)樣量和操作條件的控制不很?chē)栏?，但必須準確稱(chēng)量試樣和內標物，否則會(huì )影響實(shí)驗結果。
